多樣品組織研磨機使用方法步驟及注意事項有哪些?
在實驗室中多樣品組織研磨機的使用率很高,其中對于動物的研究課題實驗也不例外,這種類型的研究在進行實驗前往往需要先將動物組織進行樣品前處理操作,這時就會使用樣品研磨機,得到的處理結(jié)果也會更準(zhǔn)確快速。
但是在進行樣品處理時需要做好如下操作:
1、在實驗操作前,先將PBS緩沖液進行4℃預(yù)冷,然后準(zhǔn)備若干冰塊備用;使用75%濃度的乙醇溶液對鑷子、剪刀進行消毒處理,如果還需對動物組織進行RNA提取,還要使用酒精燈對鑷子和剪刀進行再次消毒,以盡可能消除RNA酶。
2、所有實驗耗材都應(yīng)進行高溫高壓滅菌,以保證各種酶不會對后續(xù)實驗產(chǎn)生影響;將2ml離心管置于冰塊上,并加入適量的PBS緩沖液,一般情況下,實驗所需的組織勻漿的質(zhì)量體積比為10%(即0.1g組織樣本加入1ml液體)?! ?/p>
3、將需要進行研磨的組織樣本從零下80℃的冰箱內(nèi)取出,置于冰上,使用滅菌后的鑷子和剪刀,將樣本切成小塊(每塊重量不宜超過0.02g,總重量不宜超過0.2g),然后放入加好相應(yīng)液體的離心管中,備用;取出已經(jīng)滅菌的氧化鋯研磨球,按照每個離心管一顆的數(shù)量,將鋯球放入離心管中。此過程需使用鑷子進行該操作,并且盡量避免液體飛濺而導(dǎo)致樣本污染。
使用多樣品組織研磨機處理動物組織的方法步驟如下:
放入樣品和鉛球的離心管標(biāo)記好編號,然后放入專用的研磨適配器中,蓋好蓋子,將適配器固定在研磨機上,設(shè)置振動頻率為1000次/分鐘,振動時間為5分鐘?! ?/p>
但由于振動過程中的撞擊和摩擦,會產(chǎn)生大量熱量,使得離心管溫度升高,所以可以選擇具有低溫控制功能的設(shè)備,或者將適配器放入液氮罐進行預(yù)冷凍,并減少研磨時間,避免高溫對樣本的破壞。
使用多樣品組織研磨機切勿盲目操作設(shè)備,以免研磨結(jié)果不理想,效果不準(zhǔn)確:我們在進行實驗的時候由于樣品的特殊性,因此 要在低溫狀態(tài)下進行,以達到降低樣本中的蛋白質(zhì)、DNA的降解速度。所有實驗操作均需要佩戴醫(yī)用口罩、手套,實驗服,在進行離心操作前,提前開機進行預(yù)冷,保持4℃左右的低溫環(huán)境,研磨過程中注意研磨球不要放多,以免導(dǎo)致管壁破裂,造成樣品的丟失及污染。
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